志賀氏菌（Shigelia）引起的細(xì)菌性痢疾常發(fā)現(xiàn)于人員大量集中的地方，如餐廳和食堂。與其相關(guān)的食品包括色拉、生蔬菜、奶和奶制品、肉禽、水果和面包制品等。本公司自主研發(fā)的志賀氏菌活菌檢測試劑盒能快速特異地檢測出此類食品中含有的志賀氏菌，且相比DNA-PCR的檢測方法，本檢測方法可以區(qū)分死菌和活菌，因此不需要進(jìn)行再次驗(yàn)證。本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光RT-PCR反應(yīng)對食品中的志賀氏菌進(jìn)行檢測，靈敏度高，特異性強(qiáng)，適用于乳制品、肉制品中志賀氏菌的定性檢測。

產(chǎn)品規(guī)格

40次/盒

主要成分

儲存條件

本試劑盒保存于-20℃，有效期12個(gè)月。

檢測步驟

1.樣本處理取25ml(g)樣品，加入 225ml的培養(yǎng)基，均質(zhì)后于 37 度增菌培養(yǎng)約 6h。

2.樣本RNA 提取取1ml增菌液，采用商品化的細(xì)菌 RNA提取試劑盒，按照試劑盒說明提取樣本 RNA 。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒將 RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA 待用。

3.試劑準(zhǔn)備冰上解凍反應(yīng)試劑，反應(yīng)液保持避光，解凍后將反應(yīng)液混勻并簡短離心，按每管15ul的量分裝至 PCR管中。

4.PCR加樣每管中加入cDNA樣本 10ul，蓋好管蓋，簡短離心，同時(shí)做陽性對照，陰性對照和空白對照（以水代替樣本 cDNA ）。

5.PCR擴(kuò)增將加好的樣品放置在PCR儀中， 熒光通道選擇FAM， PCR 反應(yīng)參數(shù)見表，使用不同的PCR儀，反應(yīng)參數(shù)可適當(dāng)調(diào)整。

6.結(jié)果分析

基線和閾值的設(shè)置：基線范圍設(shè)置在3-15個(gè)循環(huán)，閾值設(shè)置在基線剛好超過陰性對照擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)。

質(zhì)量控制：陽性對照CT≤30，有S 型擴(kuò)增曲線；陰性對照無CT值，擴(kuò)增曲線為直線；空白對照無CT值，擴(kuò)增曲線為直線。若出現(xiàn)任一結(jié)果不正常，需重做實(shí)驗(yàn)。

結(jié)果判定

1.檢測樣品無CT值，曲線為直線或無S 型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陰性。

2.檢測樣品CT≤35，出現(xiàn)S型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陽性。

3.檢測樣品35﹤CT﹤40并有S型擴(kuò)增曲線，需適當(dāng)增加DNA模板量后重新做實(shí)時(shí)熒光PCR檢測，再次檢測結(jié)果CT值仍處于35和40之間，并且有S型擴(kuò)增曲線，判定結(jié)果為陽性，否則判定為陰性。

最低檢測限

5cfu/25g(ml)

注意事項(xiàng)

1.初次使用前請仔細(xì)閱讀說明書，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

2.實(shí)驗(yàn)操作要嚴(yán)格分區(qū)，防止污染。

3.RNA提取時(shí)要使用無RNA酶的槍頭和管子，防止RNA降解。

4.反應(yīng)液反復(fù)凍融會降低靈敏度，建議分管保存。

5.本試劑盒僅供定性篩查用。